크리오-EM 는 무엇 이며, 어떻게 작동 합니까?
크리오-EM술 에서는 연구원 들 이 세포, 바이러스, 분자 복합체, 혹은 다른 구조 를 빠르게 얼어붙여서 물 분자 들 이 결정 을 형성 할 시간 을 갖지 못하게 한다. 이렇게 하면 표본 이 자연 상태 에서 보존 된다.과학자 들 은 전자 현미경 을 사용 하여 얼어붙은 표본 을 전자 빔 으로 날려버린다이것은 디지털 탐지기에 샘플의 2차원 프로젝션을 만듭니다.표본의 수백 개의 각도 프로젝션을 만들어서 각도의 평균을 취해서최근 크리오-EM 분야의 발전은 단백질과 다른 생물학적 구조의 매우 상세한 이미지를 제공합니다.RNA-프로테인 복합체와 같은 더 큰 구조를 포함하여.
냉동 전자 현미경 (Cryo-EM) 도입:
지난 10 년 동안 냉동 전자 현미경 (cryo-EM) 은 전자 현미경에 대한 샘플 준비의 전통적인 방법을 점점 더 대체했습니다.테일러와 글레이저와 두보셰와 동료들의 선구적인 작업이 이 발전의 길을 열었습니다., 생물학적 전자 현미경의 양자 도약을 제시하여 완전히 수분 된 표본의 이미지를 원산지에 가까운 상태로 얻을 수있었습니다.
크리오-EM라는 용어는 유리성 얼음에 삽입된 샘플에 적용될 때 다양한 전송 전자 현미경 영상 모달을 의미합니다.크리오-EM의 세 가지 주요 분야는 분자 구조 생물학의 맥락에서 관련이 있습니다.: 전자 결정학, 단일 입자 분석 및 전자 단층 촬영.
전자 결정학은 4Å 이하의 2D 결정을 형성하는 단백질의 구조를 결정하는 데 장점을 제공합니다 (예를 들어 물을 운반하는 막 단백질 - 아쿠아포린과 같이).선막 단백질은 특히 2차원 결정의 형성에 유망한 후보입니다.2A 이상의 해상도를 얻었습니다. three dimensional electron crystallography of protein microcrystals (microED) has been developed and is showing promises in solving high resolutions structures of proteins forming tiny 3D-crystals (200 nm) usually not amenable for study by x-ray crystallography.
단일 입자 분석은 종종 매우 이질적이고, 변질성이 있고, 결정화하기가 매우 어려운 (예를 들어,리보솜 또는 26S 프로테아솜) 로 루틴 해상도 3?? 10 Å, 가장 좋은 경우에는 2 Å 이하샘플 크기 범위: 5~150 nm
엑스레이 결정학이란 무엇이며 어떻게 작동합니까?
엑스레이 결정학은 엑스레이를 엑스레이를 통해 엑스레이를 발사합니다.디지털 카메라에서 이미지가 캡처되는 방식과 비슷합니다.컴퓨터 는 산산조각 된 X선 의 강도를 측정 하여 결정 분자 내 의 각 원자 에 위치 를 부여 한다. 그 결과 는 3차원 디지털 이미지 이다.이 방법 은 알려진 단백질 구조 의 85 퍼센트 이상 을 결정 하기 위해 사용 되었습니다.
엑스레이 결정학과 크리오-EM에 대한 몇 가지 세부 사항:
1작은 단백질은 크로-EM에 의해 식별하기가 어려울 수 있기 때문에 X선 결정학에 더 적합합니다.
2엑스선 결정학은 매우 높은 해상도를 얻을 수 있지만, 최근 몇 년 동안 크리오-EM은 비교 가능한 결과를 얻었습니다.
3큰 구조, 복합체 및 세포막 단백질은 결정화하기가 어려울 수 있습니다. 따라서 크리오-EM은 더 쉬운 옵션이 될 수 있습니다.
4EM (negative stain) 는 샘플의 급속한 스크리닝을 제공하여 집합을 배제하고 oligomerization를 결정하여 샘플의 행동과 그 내용에 대한 시각적 전반을 제공합니다.
5크리오-EM는 X선 결정학보다 낮은 단백질 양을 필요로 합니다. 이 방법은 2mg 미만의 단백질 수확량 (<5-10mg/ml) 을 가진 샘플에 도움이 될 수 있습니다.*
KS-V 펩타이드 크리오-EM서비스 플랫폼:
크리오-EM 는 무엇 이며, 어떻게 작동 합니까?
크리오-EM술 에서는 연구원 들 이 세포, 바이러스, 분자 복합체, 혹은 다른 구조 를 빠르게 얼어붙여서 물 분자 들 이 결정 을 형성 할 시간 을 갖지 못하게 한다. 이렇게 하면 표본 이 자연 상태 에서 보존 된다.과학자 들 은 전자 현미경 을 사용 하여 얼어붙은 표본 을 전자 빔 으로 날려버린다이것은 디지털 탐지기에 샘플의 2차원 프로젝션을 만듭니다.표본의 수백 개의 각도 프로젝션을 만들어서 각도의 평균을 취해서최근 크리오-EM 분야의 발전은 단백질과 다른 생물학적 구조의 매우 상세한 이미지를 제공합니다.RNA-프로테인 복합체와 같은 더 큰 구조를 포함하여.
냉동 전자 현미경 (Cryo-EM) 도입:
지난 10 년 동안 냉동 전자 현미경 (cryo-EM) 은 전자 현미경에 대한 샘플 준비의 전통적인 방법을 점점 더 대체했습니다.테일러와 글레이저와 두보셰와 동료들의 선구적인 작업이 이 발전의 길을 열었습니다., 생물학적 전자 현미경의 양자 도약을 제시하여 완전히 수분 된 표본의 이미지를 원산지에 가까운 상태로 얻을 수있었습니다.
크리오-EM라는 용어는 유리성 얼음에 삽입된 샘플에 적용될 때 다양한 전송 전자 현미경 영상 모달을 의미합니다.크리오-EM의 세 가지 주요 분야는 분자 구조 생물학의 맥락에서 관련이 있습니다.: 전자 결정학, 단일 입자 분석 및 전자 단층 촬영.
전자 결정학은 4Å 이하의 2D 결정을 형성하는 단백질의 구조를 결정하는 데 장점을 제공합니다 (예를 들어 물을 운반하는 막 단백질 - 아쿠아포린과 같이).선막 단백질은 특히 2차원 결정의 형성에 유망한 후보입니다.2A 이상의 해상도를 얻었습니다. three dimensional electron crystallography of protein microcrystals (microED) has been developed and is showing promises in solving high resolutions structures of proteins forming tiny 3D-crystals (200 nm) usually not amenable for study by x-ray crystallography.
단일 입자 분석은 종종 매우 이질적이고, 변질성이 있고, 결정화하기가 매우 어려운 (예를 들어,리보솜 또는 26S 프로테아솜) 로 루틴 해상도 3?? 10 Å, 가장 좋은 경우에는 2 Å 이하샘플 크기 범위: 5~150 nm
엑스레이 결정학이란 무엇이며 어떻게 작동합니까?
엑스레이 결정학은 엑스레이를 엑스레이를 통해 엑스레이를 발사합니다.디지털 카메라에서 이미지가 캡처되는 방식과 비슷합니다.컴퓨터 는 산산조각 된 X선 의 강도를 측정 하여 결정 분자 내 의 각 원자 에 위치 를 부여 한다. 그 결과 는 3차원 디지털 이미지 이다.이 방법 은 알려진 단백질 구조 의 85 퍼센트 이상 을 결정 하기 위해 사용 되었습니다.
엑스레이 결정학과 크리오-EM에 대한 몇 가지 세부 사항:
1작은 단백질은 크로-EM에 의해 식별하기가 어려울 수 있기 때문에 X선 결정학에 더 적합합니다.
2엑스선 결정학은 매우 높은 해상도를 얻을 수 있지만, 최근 몇 년 동안 크리오-EM은 비교 가능한 결과를 얻었습니다.
3큰 구조, 복합체 및 세포막 단백질은 결정화하기가 어려울 수 있습니다. 따라서 크리오-EM은 더 쉬운 옵션이 될 수 있습니다.
4EM (negative stain) 는 샘플의 급속한 스크리닝을 제공하여 집합을 배제하고 oligomerization를 결정하여 샘플의 행동과 그 내용에 대한 시각적 전반을 제공합니다.
5크리오-EM는 X선 결정학보다 낮은 단백질 양을 필요로 합니다. 이 방법은 2mg 미만의 단백질 수확량 (<5-10mg/ml) 을 가진 샘플에 도움이 될 수 있습니다.*
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